人神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞
產(chǎn)品名稱 :人神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB0615h
組織來源 : 腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介:
神經(jīng)少突膠質(zhì)細胞分離自腦皮層組織。大腦分左右兩個半球,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì)) 覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構成的白質(zhì)。每一個半球都有三個面,即外側面(約占整個皮質(zhì)面積的1/3) 、內(nèi)側面和底面(占2/3的面積) 。半球表面有很多深淺不等的溝或裂,溝或裂之間的隆起叫回,它們大大增加了大腦的表面積。大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。
由于三溝裂之界隔,使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。少突膠質(zhì)細胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),在銀浸染標本中,少突膠質(zhì)細胞比星狀膠質(zhì)細胞小,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質(zhì)細胞或寡突膠質(zhì)細胞。但是用特異性免疫細胞化學染色顯示的少突膠質(zhì)細胞,其突起并不少,而且還有許多分支。少突膠質(zhì)細胞的主要功能是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中包繞軸突、形成絕緣的髓鞘結構、協(xié)助生物電信號的跳躍式高效傳遞并維持和保護神經(jīng)元的正常功能。其異常不僅會導致中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變,還會引起神經(jīng)元損傷或精神類疾病,甚至可以引發(fā)腦腫瘤。
根據(jù)少突膠質(zhì)細胞的分布和位置可分為三種
① 束間少突膠質(zhì)細胞(in terfasicular-oligodendrocyte) ,分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的白質(zhì)的神經(jīng)纖維束之間。
② 神經(jīng)細胞周少突膠質(zhì)細胞(perineuronal-oligodendrocyte) ,分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的灰質(zhì)區(qū),常位于神經(jīng)細胞周圍,與神經(jīng)細胞的關系密切,故又稱為神經(jīng)細胞周衛(wèi)星細胞(perineuronal-sa tellite-cell) ,但在神經(jīng)細胞胞體與此類細胞之間亦常有星形膠質(zhì)細胞的薄片狀突起分隔。
③ 血管周少突膠質(zhì)細胞(pcrivascular-oligodendrocyte) ,主要分布在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的血 管周圍。少突膠質(zhì)細胞形成的髓鞘膜是最為特化和復雜動物細胞膜之一,其上有眾多跨膜蛋白和表面蛋白用以維持髓鞘的致密穩(wěn)定結構。如半乳糖腦苷脂(G C ) ,它是髓鞘的一種主要類脂,用G C 抗體鑒別成熟的少突膠質(zhì)細胞是一種比較早的免疫鑒定方法。近十年來,神經(jīng)發(fā)育學科進展較快,更多的少突膠質(zhì)細胞分子標記物被鑒定出來,如PD G FR a、M bp、C N P、SO X-10。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含B-27 Supplem ent、PDGF-A A 、bFG F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細胞形態(tài) :梭形、多角形
傳代特性 :不增殖。不傳代
傳代比例 :不傳代
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和公司技術部溝通。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。