人皮層神經(jīng)元細胞
產(chǎn)品名稱 :人皮層神經(jīng)元細胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB0614h
組織來源 : 腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介:
皮層神經(jīng)元細胞分離自腦皮層組織。皮層神經(jīng)元細胞是構成中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構和功能的基本單位。神經(jīng)元是具有長突觸(軸突) 的細胞,它由細胞體和細胞突起構成。
在長的軸突上套有一層鞘,組成神經(jīng)纖維,它的末端的細小分支叫做神經(jīng)末梢。細胞體位于腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)中,細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細胞體是細胞含核的部分,其形狀大小有很大差別,直徑約4-120微米。核大而圓,位于細胞中央,染色質(zhì)少,核仁明顯。細胞質(zhì)內(nèi)有斑塊狀的核外染色質(zhì),還有許多神經(jīng)元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分,又可分為樹突和軸突。每個神經(jīng)元可以有一或多個樹突,可以接受刺激并將興奮傳入細胞體。每個神經(jīng)元只有一個軸突,可以把興奮從胞體傳送到另一個神經(jīng)元或其他組織,如肌肉或腺體。皮質(zhì)神經(jīng)元是大腦皮質(zhì)的主要組成細胞之一,是大腦進行功能活動調(diào)節(jié)的基本單位,參與動物多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程。
通過形態(tài)學觀察顯示神經(jīng)元從貼壁、伸出突起開始。突起逐漸增多,而后突起進一步增多并逐漸成網(wǎng),同時細胞胞體增大,周邊光暈明顯。10-12d細胞最為豐滿,隨后神經(jīng)元開始裂解,突起逐漸減少,細胞已退化變性,輪廓模糊,光暈消失,細胞變形。
細胞特性
1) 組織來源于人的正常腦組織。本細胞為終末分化細胞,增殖能力很弱,建議客戶收到細胞后直接用于后續(xù)實驗,不要進行擴增培養(yǎng)。
2) 細胞鑒定:NSE免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5) 細胞生長方式:不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 :PLL(0. 1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 :含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細胞形態(tài) :神經(jīng)元細胞樣
傳代特性 :屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群
傳代比例 :不傳代
消 化 液 :0. 125% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和公司技術部溝通。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。