土壤脂肪酶（Solid-Lipase，S-LPS）活性試劑盒說明書

土壤脂肪酶（Solid-Lipase，S-LPS）活性試劑盒說明書

                                                  微量法100/96S

注  意  ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。

測定原理：

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算LPS活性。

自備儀器和用品：

研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液槍、甲苯80mL、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體65mL×2瓶，4℃保存。

試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。

試劑三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存（自備）。

試劑四：液體10mL×1瓶，4℃保存。

標準品：液體10 μL×1瓶，10 µmol/mL的標準溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。

樣本處理：

建議稱取約0.1g土樣，加入1mL試劑一進行冰浴勻漿，再用回旋式振蕩器振蕩提取15min，4℃，4000g離心10min，取上清待測。

S-LPS測定操作：

1.        分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節(jié)波長到710 nm，蒸餾水調零。

2.        試劑一和試劑二置于37℃水浴預熱30min。

3.        在1.5mL EP管中依次加入下列試劑

37℃振蕩反應10 min

37℃振蕩反應10 min后，8000g，25℃，離心10min，取上清液

37℃振蕩反應5 min后，靜置5min，取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm處測定吸光值。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

S-LPS活性計算公式：

活性單位定義：37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C標準品×(A測定管-A空白管)÷（A標準管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]÷W

C標準品：10 µmol/mL；V反總：反應總體積，0.8mL；V樣：反應中加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL； W：樣本質量，g；T：催化反應時間，10 min。