土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC）試劑盒說(shuō)明書(shū)

土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC）試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                     微量法100管/48樣

注   意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

S-SC能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機(jī)體吸收，其酶促作用產(chǎn)物與土壤中有機(jī)質(zhì)、氮、磷含量，微生物數(shù)量及土壤呼吸強(qiáng)度密切關(guān)，是評(píng)價(jià)土壤肥力的重要指標(biāo)。

測(cè)定原理：

S-SC催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與S-SC活性成正比。

自備用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑組成和配制：                                                                                                                                                                       

試劑一：甲苯1mL×1瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：液體7.5mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入22mL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；

試劑四：液體22mL×1瓶，4℃保存。

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。

測(cè)定步驟和加樣表：

振蕩混勻，使土樣全部濕潤(rùn)，37℃水浴15min

充分混勻，放入37℃水浴培養(yǎng)24小時(shí)，10000 g，4℃，離心5min，取上清液

充分混勻，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，蒸餾水稀釋10倍（可以吸取100μL，加入900μL蒸餾水稀釋；若吸光度大于4，可以加大稀釋倍數(shù)），取200uL至微量石英比色皿或96孔板中510nm處讀吸光值A(chǔ)。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-SC活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 4.9x -0.062；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)S-SC活力單位。

S-SC活力(mg/d/g 土樣)=( ΔA+0.062) ÷4.9×10×V反總÷W÷T =20.4×(ΔA+0.062)

10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時(shí)間，1d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL；W：樣本質(zhì)量，0.03g。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 2.45x -0.062；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)S-SC活力單位。

S-SC活力(mg/d/g 土樣)=( ΔA+0.062) ÷2.45×10×V反總÷W÷T =40.8×(ΔA+0.062)

10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時(shí)間，1d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL；W：樣品質(zhì)量，0.03g。