γ干擾素ELISA檢測試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，檢測釋放至血漿中的γ-干擾素，根據(jù)γ-干擾素水平判斷被檢牛是否感染過牛分枝桿菌。檢測準(zhǔn)確：預(yù)先包被的抗體是IFNγ單克隆抗體。檢測相抗體也是IFNγ單克隆抗體，并經(jīng)生物素標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人IFNγ呈正相關(guān)。
γ干擾素ELISA檢測試劑盒使用的基本原理有：
1. 抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，或是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；
2. 抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
3. 酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。
γ干擾素ELISA檢測試劑盒的使用注意事項有哪些？
實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請避光保存。
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡十五到三十分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
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