細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。要達(dá)到細(xì)胞生長所需的條件,需要借助細(xì)胞耗材來實現(xiàn)。培養(yǎng)瓶適合長期培養(yǎng)、傳代、作為種子細(xì)胞,瓶口較小,細(xì)胞不易被污染。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、病毒學(xué)、微生物學(xué)和制藥行業(yè)等領(lǐng)域。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的使用流程:
1、擰開蓋子,用傾斜或者泵打的方式將培養(yǎng)基注入細(xì)胞工廠內(nèi),細(xì)胞懸液緩慢流入細(xì)胞工廠各層中。蓋上蓋子,靜止。
2、緩慢將細(xì)胞工廠測立,有加液口的一側(cè)背向自己,靜置使細(xì)胞懸液緩慢均勻流入各層中。
3、側(cè)向旋轉(zhuǎn)九十度,保持進(jìn)液口朝上,靜置使細(xì)胞懸液緩慢均勻流入各層中。
4、雙手握住進(jìn)液口的一面,緩慢放平,避免液體大幅度晃動。
5、移致合適的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
6、培養(yǎng)結(jié)束后,將培養(yǎng)基倒入收集容器。
細(xì)胞培養(yǎng)時生長減慢的原因和解決辦法如下:
原因:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子等耗盡或缺乏或已被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液組分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗找到可能的原因。
解決辦法:
增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補(bǔ)加谷氨酰胺或生長因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在兩周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測支原體。