L4440質(zhì)粒

感謝您選擇優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司提供的微生物菌種。本中心目前有標(biāo)準(zhǔn)菌種（斜面、甘油菌、穿刺菌和凍干粉四種形式）、基因工程菌種 （斜面、甘油菌和穿刺菌三種形式）、食用益生菌和工業(yè)發(fā)酵菌種，基本涵蓋了環(huán)境、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、分析、食品、藥用真菌等各類生產(chǎn)和科研微生物。微生物總種類達(dá)到 2000 多種，并且該數(shù)量每天正在不斷增加。

菌種簡(jiǎn)介：

培養(yǎng)基名稱：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)

生長(zhǎng)條件：LB +氨芐青霉/素，37℃（克隆菌株DH5α，2790bp）

存儲(chǔ)條件：2-8℃

安全等級(jí)：0

操作步驟：

1.溶解： 收到質(zhì)粒干粉后，請(qǐng)加入 20μl 無菌水至管底，溶解質(zhì)粒，室溫靜置 1min；

2.混合（吸附質(zhì)粒）： 200μl 感受態(tài)細(xì)胞 + 質(zhì)粒 DNA 5~10µl 混勻，冰上放置 30min；

3.熱激導(dǎo)入： 42℃靜置 90s；

4.收縮膜孔： 冰浴 2min；

5.修復(fù)培養(yǎng)： 毎管加 800µl LB 液體培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng) 1h 150 r/min；

6.篩選培養(yǎng)： 將適當(dāng)體積（100 µl）的復(fù)蘇細(xì)胞，涂布在相應(yīng)抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（瓊脂面務(wù)必干燥后）， 倒置培養(yǎng) 12-16h，出現(xiàn)菌落。

7.提取： 挑取單克隆菌落至相應(yīng)抗性 LB 液體培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng) 12-16h，根據(jù)試驗(yàn)需要提取質(zhì)粒。

提供形式：質(zhì)粒干粉

菌種培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

1.微生物菌種應(yīng)保存于低溫、清潔和干燥的地方，室溫放置時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；

2.菌種操作在無菌條件下進(jìn)行，接種完畢應(yīng)該滅菌再做丟棄處理；

3.斜面菌種和穿刺菌種保存時(shí)間通常為 3-6 個(gè)月，應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)結(jié)轉(zhuǎn)；凍干粉保存時(shí)間通常是 2-25 年；甘油菌保  存時(shí)間為 2-5 年;

4.凍干首-次活化,干粉要全部用完，不能保留。用0.2-0.5m1的培養(yǎng)液或者無菌水溶解,接種在1-2個(gè)平板上，因凍干菌種處于休眠狀態(tài),請(qǐng)勿接種多個(gè)平板，以免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功。

5.如果有不明白之處，應(yīng)先與我中心聯(lián)系，避免不必要的損失。

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