Hep G2/LUC 人肝癌細胞熒光素酶標記

Hep G2/LUC 人肝癌細胞熒光素酶標記

細胞特性：

1） 來源：肝細胞癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為已經(jīng)構建好的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細胞，隨細胞傳代次數(shù)的增加，其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完培維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完培繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完培正常培養(yǎng)。

運輸和保存：

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的注意事項：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

培養(yǎng)注意事項：1. hepg2細胞復蘇或傳代后會有少部分的細胞貼壁和部分懸浮的細胞，復蘇兩天后細胞會從貼壁細胞向外開始生長，有時細胞再生長過程中，細胞會再貼壁細胞的上方生長，形成不同的細胞層，這種情況會有發(fā)生。 在細胞復蘇的一周內(nèi)，培養(yǎng)瓶中 通常會有懸浮的活的細胞團，在換液過程中不要丟棄在這些活的懸浮細胞，可以通過離心（125×g）回收細胞，重新打回到培養(yǎng)瓶中，分離或者丟棄漂浮的活細胞會使細胞數(shù)量變少，引起細胞的停滯生長或細胞死亡。

2.培養(yǎng)條件的細微變化，尤其是pH和培養(yǎng)基中血清的質(zhì)量，可能會影響細胞的生長狀況，在細胞的生長過程中會有細胞內(nèi)的液泡出現(xiàn)，特別在細胞快要融合是會出現(xiàn)這種情況。培養(yǎng)細胞時使用未被滅活的高質(zhì)量、低內(nèi)毒素的胎牛血清，可以使細胞更好的貼壁和形成單層細胞。

3. 細胞在生長過程中可以通過將血清濃度提到到20%來改善細胞生長緩慢的情況。（參考atcc 有關該細胞的描述）

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

Hep G2/LUC 人肝癌細胞熒光素酶標記

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