大鼠頸動脈血管平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :大鼠頸動脈血管平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB1267h
組織來源 :頸動脈組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介:
頸動脈平滑肌細(xì)胞分離自頸動脈組織;頸動脈存在于脊椎動物頸部的動脈。有頸外動脈和頸內(nèi)動脈。前者分布至頭頂部和顏面部。后者進(jìn)入顱內(nèi)分布至腦和眼眶內(nèi)。在發(fā)生時,鰓弓中不形成鰓的下頜弓,所以,從大動脈也不分入鰓動脈和出鰓動脈。從腹大動脈的前方發(fā)出頸外動脈,頸內(nèi)動脈是通向第三鰓弓的血管延伸而形成的,但在某些魚類、有尾兩棲類和爬行類中,這一血管也將一些血液送至大動脈根。其它的高等脊椎動物的大動脈根,在第三、第四大動脈弓之間消失,所以,其第三大動脈弓形成純粹的頸動脈。在相當(dāng)于第三、第四大動脈弓之間的腹行大動脈的部分稱為頸總動脈干(com m on co-rotid trunk);高等脊椎動物,是由頸總動脈干分為左、右頸總動脈,然后再各分支為頸外動脈和頸內(nèi)動脈。
頸動脈是將血液由心臟輸送至頭、面、頸部的大血管,是腦的主要供血血管之一,由內(nèi)膜、平滑肌層及外膜層構(gòu)成。與其相關(guān)常見疾病為頸動脈狹窄,頸動脈狹窄導(dǎo)致的缺血癥狀主要包括,頭暈、記憶力、定向力減退、意識障礙、黑朦、偏側(cè)面部和/或肢體麻木和/或無力、伸舌偏向、言語不利、不能聽懂別人說的話等。研究頸動脈平滑肌細(xì)胞的體外培養(yǎng),為研究治療頸動脈狹窄提供一個細(xì)胞模型具有重要意義。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 : 培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 貼壁
細(xì)胞形態(tài) : 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 : 可傳3代左右
傳代比例 : 1:2
消 化 液 : 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。