大鼠三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞
產(chǎn)品名稱 :大鼠三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB1257h
組織來源 :臍帶組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介:
三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞分離自三叉神經(jīng)組織;三叉神經(jīng)為最粗大的混合性腦神經(jīng),含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運動兩種纖維。其特殊內(nèi)臟運動纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運動核,纖維組成三叉神經(jīng)運動根,由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦,位于感覺根下內(nèi)側(cè),最后進入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中,經(jīng)卵圓孔出顱,隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等。運動根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維,主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺神經(jīng)纖維為主,這些纖維的細胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)(半月節(jié))內(nèi),該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部jian端的前面三叉神經(jīng)壓跡處,為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。
神經(jīng)膠質(zhì)細胞是神經(jīng)組織中除神經(jīng)元以外的另一大類細胞,也有突起,但無樹突和軸突之分,廣泛分布于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)。在哺乳類動物中,神經(jīng)膠質(zhì)細胞與神經(jīng)元的細胞數(shù)量比例約為10:1。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(C N S)中的神經(jīng)膠質(zhì)細胞主要有星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞(與前者合稱為大膠質(zhì)細胞)和小膠質(zhì)細胞等。傳統(tǒng)認(rèn)為膠質(zhì)細胞屬于結(jié)締組織,其作用僅是連接和支持各種神經(jīng)成分,其實神經(jīng)膠質(zhì)還起著分配營養(yǎng)物質(zhì)、參與修復(fù)和吞噬的作用,在形態(tài)、化學(xué)特征和胚胎起源上都不同于普通結(jié)締組織。星形膠質(zhì)前體細胞主要表達Vim entin,而成熟之后表達Vim entin和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(G FA P),故G FA P被認(rèn)為是星形膠質(zhì)細胞成熟的標(biāo)志物。
細胞特性
1) 組織來源于實驗動物的正常三叉神經(jīng)組織。
2) 細胞鑒定:GFAP免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5) 細胞生長方式:不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 貼壁
細胞形態(tài) : 梭形、多角形
傳代特性 : 可傳3代左右
傳代比例 : 1:2
消 化 液 : 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。