人骨髓來源巨噬細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :人骨髓來源巨噬細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB0675h
組織來源 :骨髓
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介:
骨髓來源巨噬細(xì)胞分離自骨髓。骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細(xì)菌、病毒等。某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。
因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨) 的骨髓腔和扁平骨(如髂骨) 的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細(xì)胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞,有多種功能,是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。巨噬細(xì)胞較易獲得,便于培養(yǎng),并可進(jìn)行純化。
巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群,在條件適宜下可生活2-3周,多用做原代培養(yǎng),難以長期生存。巨噬細(xì)胞(M acro p h ages) 是一種位于組織內(nèi)的白血球,源自單核細(xì)胞,而單核細(xì)胞又來源于骨髓中的前體細(xì)胞。巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞皆為吞噬細(xì)胞,在脊椎動物體內(nèi)參與非特異性防衛(wèi)(先天性免疫) 和特異性防衛(wèi)(細(xì)胞免疫) 。它們的主要功能是以固定細(xì)胞或游離細(xì)胞的形式對細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌作用(即吞噬以及消化) ,并激活淋巴球或其他免疫細(xì)胞,令其對病原體作出反應(yīng)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :巨噬細(xì)胞樣
傳代特性 :屬于終末分化細(xì)胞。屬于不增殖細(xì)胞群
傳代比例 :不傳代
消 化 液 :利多ka因(12m M )
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。