您好！歡迎訪問優(yōu)利科（上海）生命科學有限公司網(wǎng)站！
全國服務(wù)咨詢熱線：
15021281375
15021281375
簡要描述：乙醇脫氫酶（ADH）活性測定試劑盒測定意義：ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶，催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換，在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成，肝臟損傷導致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。
更新時間：2024-06-29廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家生產(chǎn)地址：上海訪 問 量：686詳細介紹
| 品牌 | YLKBIO | CAS | 詳見說明書 |
|---|---|---|---|
| 分子式 | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
| 分子量 | 詳見說明書 | 貨號 | YLK-SH118 |
| 規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 主要用途 | 科研 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 測定方法： | 微量法、紫外分光光度法 |
乙醇脫氫酶（ADH）活性測定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶，催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換，在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成，肝臟損傷導致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。
測定原理：
ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+，NADH在340nm處有吸收峰，而NAD+沒有；測定340nm 吸光度下降速率，來計算ADH活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，室溫保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存，臨用前每瓶加入9mL試劑二，現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑四：液體×1支，4℃保存。
粗酶液提取：
1、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
2、 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。
3、血清等液體：直接測定。
ADH測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL樣本上清液、160μL試劑三和20μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2。△A測定管=A1-A2。
計算公式：
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△A ÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/g 鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
活性單位定義：25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，200μL=2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下：
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=3215×△A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/g 鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=3215×△A÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
活性單位定義：25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=3215×△A÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=3215×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，200μL=2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1min。
乙醇脫氫酶（ADH）活性測定試劑盒僅供科研！
產(chǎn)品咨詢
地址：金大公路8218號1幢
郵箱：1431486511@qq.com
傳真：
電話
微信掃一掃
當前位置：