土壤酸性轉(zhuǎn)化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）試劑盒說明書

土壤酸性轉(zhuǎn)化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）試劑盒說明書

                                        微量法100管/48樣

注   意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

S-AI在pH 為4.5~5.0（酸性）條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。

測定原理：

S-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。

自備用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存;

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入25mL試劑一充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存;

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存；

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。

測定步驟和加樣表：

混勻， 37℃準(zhǔn)確水浴30min后，95℃水浴10min（蓋緊，以防水分散失），流水冷卻后

充分混勻（以保證濃度不變），10000g 25℃離心10min，取上清液

混勻，95℃水浴10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻， 510nm處，記錄各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù))，ΔA=A測定-A對照。

S-AI活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個S-AI活力單位。

S-AI活力（mg/d /g土樣）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V反總÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)

V反總：反應(yīng)體系總體積：0.4mL；T：反應(yīng)時間，1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.05g；1mg=1000μg。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個S-AI活力單位。

S-AI活力（mg/d/g土樣）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V反總÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)

V反總：反應(yīng)體系總體積：0.4mL；T：反應(yīng)時間，1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.05g；1mg=1000μg。