土壤全鐵試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
鐵元素是一種十分重要的植物營(yíng)養(yǎng)元素,土壤中鐵含量直接影響著植物吸收利用以及生長(zhǎng)代謝。
測(cè)定原理:
在pH2-9范圍內(nèi),鹽酸羥胺將三價(jià)鐵轉(zhuǎn)化為二價(jià)鐵,與鄰菲羅琳反應(yīng)生成橙紅色配合物,在510nm有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制:
提取劑:粉劑×1瓶,4℃保存。
提取液:液體100mL×4瓶,4℃保存。
試劑一:液體2mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體6mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體4mL×1瓶,4℃避光保存。
樣本處理:
新鮮土樣風(fēng)干,過100目篩,按照土壤質(zhì)量(g):提取劑質(zhì)量(g)為1:4的比例(建議稱取約0.1g土樣,加入0.4g提取劑)緩慢加入提取劑于坩堝中,邊加邊攪拌均勻,然后在馬弗爐中550℃熔融10min,然后在920℃熔融30min,趁熱取出坩堝,將熔融物轉(zhuǎn)入燒杯,邊攪拌邊加4mL提取液,必要時(shí)加蓋,從燒杯口加入,防止溶液濺出,溶解30min后,5000g ,25℃離心10min,取上清液待測(cè)。
測(cè)定操作表:
空白管 | 測(cè)定管 | |
樣本(μL) | 20 | |
試劑一(μL) | 20 | 20 |
試劑二(μL) | 60 | 60 |
試劑三(μL) | 40 | 40 |
H2O(μL) | 80 | 60 |
充分混勻,25℃靜置20min | ||
于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調(diào)零,測(cè)定510nm處吸光值A,分別記為A空白管和A測(cè)定管,△A=A測(cè)定管-A空白管 |
計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.1569x -0.0173,R2 = 0.9992
全鐵含量(mg/kg)=(△A+0.0173)÷ 0.1569×V反總÷(W×V樣÷V樣總)
= 254.94×(△A+0.0173)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,4mL,W:樣本質(zhì)量,g
b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0785x -0.0173,R2 = 0.9992
全鐵含量(mg/kg)=(△A+0.0173)÷ 0.0785×V反總÷(W×V樣÷V樣總)
= 509.55×(△A+0.0173)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,4mL,W:樣本質(zhì)量,g
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