土壤堿性木聚糖酶（Soil Basic Xylanase，S-BAX）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

土壤堿性木聚糖酶（Soil Basic Xylanase，S-BAX）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                                     微量法100T/48S

注   意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，BAX一般分離自最適生長(zhǎng)pH為9 -11的微生物。

測(cè)定原理：

BAX在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計(jì)算BAX活力。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、常溫離心機(jī)、震蕩儀、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配制：

緩沖液：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過(guò)30-50目篩。

測(cè)定操作表：

1、   分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm。

2、   操作表

S-BAX計(jì)算公式：

a.        用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.8432x - 0.0293，R² = 0.9985

酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

S-BAX活力（μmol/d /g 土樣）=（△A+0.0293）÷ 2.8432×V反總×10³÷ W÷T÷ 150

                         = 16.88×（A₅₄₀+0.0058）÷ W

V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d；1000：1mmol/L =10³μmol/L；150：木糖分子量。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.4216x - 0.0293，R² = 0.9985

酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。

S-BAX活力（μmol/d /g土樣）=（△A+0.0293）÷ 1.4216×V反總×10³÷ W÷T÷ 150

                          = 33.76×（A₅₄₀+0.0058）÷ W

V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d；1000：1mmol/L =10³μmol/L；150：木糖分子量。

注意事項(xiàng)：

1. 保證震蕩反應(yīng)30min，使酶與底物充分接觸。

2. 注意90℃水浴防止爆開(kāi)，以免改變反應(yīng)體系。