土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）試劑盒說明書

土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）試劑盒說明書

                                          微量法 100管/96樣

注   意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：                           

S-PPO主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動(dòng)植物殘?bào)w分解釋放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應(yīng)生成有機(jī)質(zhì)和色素，完成土壤芳香族化合物循環(huán)，用于土壤環(huán)境修復(fù)。

測(cè)定原理：

S-PPO能夠催化鄰苯三酚產(chǎn)生有色物質(zhì)，后者在430nm有特征光吸收。

自備用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、yi醚50mL（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×2瓶，4℃保存；臨用前取一瓶，加入7mL蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑4℃保存一周。

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：yi醚50mL×1瓶，4℃保存；（自備）

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。

測(cè)定步驟：

1、   分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至430nm，蒸餾水調(diào)零。

2、  加樣表

振蕩混勻，30℃恒溫培養(yǎng)1 h

振蕩數(shù)次，室溫靜置30min，取200μL上層液于430nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)。

（注意：1、因yi醚粘度小，易掉液，吸取前需先將槍頭在上層液里潤(rùn)洗2~3次，再轉(zhuǎn)移測(cè)定；2、yi醚易揮發(fā)，轉(zhuǎn)移到96孔板后立即測(cè)定，最好一個(gè)一個(gè)測(cè)定）。

S-PPO活力計(jì)算

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 8.97x -0.003；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值A(chǔ)。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒食子素定義為一個(gè)酶活力單位。

S-PPO活力（mg /d/g 土樣）＝(A+0.003) ÷8.97×V反總÷W÷T=80×(A+0.003)

T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.02g。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 4.485x -0.003；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值A(chǔ)。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒食子素定義為一個(gè)酶活力單位。

S-PPO活力（mg/d/g 土樣）＝(A+0.003) ÷4.485×V反總÷W÷T=160×(A+0.003)

T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； V反總：反應(yīng)體系總體積0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.02g。