水土中總磷酸鹽試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
總磷酸鹽包含正磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、多聚磷酸鹽等各種磷酸鹽的形式,反應(yīng)了水土中的磷酸鹽水平,是一個水質(zhì)和土壤質(zhì)量評價的重要指標(biāo)。
測定原理:
在酸性溶液中,在分解劑和高溫條件下,將無機(jī)磷酸鹽和有機(jī)磷酸鹽水解成正磷酸鹽,正磷酸鹽可與鉬酸銨反應(yīng)成磷鉬酸,在還原劑存在時被還原為磷鉬藍(lán),在710nm處有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
天平,震蕩儀、常溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體40mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體4mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加4mL蒸餾水充分溶解,然后將試劑五全部加入試 劑四中充分混勻。
試劑五:液體×1支,4℃保存。
樣品處理:
1. 水樣:按照水樣體積(mL):試劑一體積(mL):試劑二體積(mL)為10:1:2的比例(建議取1mL水樣,加入100μL試劑一和200μL試劑二)95℃沸水浴30min,冷卻后待測。
2. 土樣:按照土壤質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL):試劑一體積(V):試劑二體積(V)=1:10:1:2(建議稱取約0.1g土樣,加入1mL蒸餾水,再加入100μL試劑一和200μL試劑二),95℃沸水浴振蕩30min,10000g ,25℃離心10min,取上清液待測。
測定操作表:
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 40 | |
試劑三(μL) | 40 | 40 |
試劑四(μL) | 40 | 40 |
蒸餾水(μL) | 120 | 80 |
充分混勻,25℃靜置10min,于96孔板測定710處吸光值A,分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管 |
計算公式:
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0237x + 0.0016,R2 = 0.9989;x為PO4-濃度μg/mL,y為吸光值△A。
1. 水樣:
總磷酸鹽含量(μg/mL)= (△A-0.0016)÷ 0.0237×V樣÷(V樣÷V樣總)
= 54.8×(△A-0.0016)
2. 土樣:
總磷酸鹽含量(μg/g)= (△A+0.0063)÷ 0.0489×V樣÷(W×V樣÷V樣總)
=54.8×(△A+0.0063)÷W
V樣:加入樣本體積;0.04mL;V樣總:樣本總體積,1.3mL;W,土樣質(zhì)量,g。
注意事項:
1. 配制的試劑四一周內(nèi)使用完。
2. 檢出限為65μg/mL或65μg/g。
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