源性成分試劑盒是一種用于檢測食品、化妝品和飼料等樣品中動物源性成分的實(shí)驗工具。其作用與使用條件如下:
一、源性成分試劑盒作用:
快速準(zhǔn)確檢測:利用實(shí)時熒光PCR技術(shù),能夠快速準(zhǔn)確地檢測出樣品中的牛源性成分。通過設(shè)計特異性引物和探針,針對動物種間基因多態(tài)性的差異進(jìn)行鑒定,確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如,基于線粒體DNA cytochrome c oxidase subunit I(COX I)基因上的差異,可以區(qū)分不同種類的動物源性成分。
監(jiān)控反應(yīng)過程:試劑盒中含有內(nèi)參照(Internal Control),可以監(jiān)控PCR反應(yīng)是否正常進(jìn)行,防止假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。通過對內(nèi)參照基因的檢測,能夠判斷反應(yīng)體系是否受到抑制或存在其他問題,從而提高檢測結(jié)果的可靠性。
適用范圍廣泛:不僅適用于黃牛(Bos taurus)的檢測,部分試劑盒還可同時檢測水牛(Bubalus bubalis)、牦牛(Bos grunniens)等其他牛類品種的成分。不過,由于檢測品種不同,擴(kuò)增序列可能存在變異,某些品種的??赡軣o法被檢出。該試劑盒可應(yīng)用于食品、化妝品和飼料等多種樣品中牛源性成分的鑒別。
二、源性成分試劑盒使用條件:
分區(qū)操作:為了防止污染,實(shí)驗要分區(qū)操作。通常分為三個區(qū)域:①反應(yīng)液配制區(qū);②樣品制備區(qū);③樣品添加區(qū)及反應(yīng)檢測區(qū)。這三個區(qū)之間必須進(jìn)行物理性隔離,避免人為因素造成污染。
試劑處理:2X Premix for Bovine制品融解后,需要上下顛倒輕輕均勻混合,避免起泡,并經(jīng)輕微離心后使用。Probe Mix for Bovine應(yīng)避光保存。
配制要求:配制Real Time PCR反應(yīng)液時應(yīng)避免強(qiáng)光照射。反應(yīng)液的配制、分裝請一定使用新的(無污染的)槍頭、Microtube等,盡量避免污染。
溫度控制:一般需要在特定的溫度條件下進(jìn)行反應(yīng),如反轉(zhuǎn)錄步驟通常在42℃下進(jìn)行,而PCR擴(kuò)增則需要在95℃預(yù)變性后,進(jìn)行若干個循環(huán)的變性、退火和延伸過程,每個循環(huán)的溫度和時間根據(jù)具體的試劑盒和實(shí)驗要求而定。