水通道蛋白ELISA試劑盒的使用要求主要包括以下幾個(gè)方面:
1.試劑盒組成與保存:
試劑盒通常包括酶標(biāo)板預(yù)包被板、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)抗體、酶標(biāo)記化二抗、基質(zhì)緩沖液、洗滌液、底物A、底物B、停止液等。
各組分的保存條件可能有所不同,如酶標(biāo)板預(yù)包被板、檢測(cè)抗體和酶標(biāo)記化二抗應(yīng)保存在-20℃以下避光干燥處,避免凍融。
2.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
將試劑平衡至室溫并且充分混合。
將洗滌液用蒸餾水稀釋,配制洗滌緩沖液。
準(zhǔn)備標(biāo)本,并按照說(shuō)明書的指導(dǎo)進(jìn)行必要的前處理和適當(dāng)稀釋。
3.樣本處理:
血清樣本需室溫血液自然凝固后離心收集上清;血漿樣本需根據(jù)要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑后離心收集上清;尿液、胸腹水、腦脊液等需無(wú)菌管收集后離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清需無(wú)菌管收集后離心;組織標(biāo)本需切割后稱重,加入PBS勻漿后離心。
標(biāo)本采集后應(yīng)盡早進(jìn)行提取和實(shí)驗(yàn),若不能立即進(jìn)行,可置于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4.水通道蛋白ELISA試劑盒操作步驟:
包括標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣、加樣、溫育、配液、洗滌、加酶、顯色、終止和測(cè)定等步驟。
每一步都需要嚴(yán)格按照說(shuō)明書的要求進(jìn)行操作,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
5.注意事項(xiàng):
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出后應(yīng)在室溫平衡一段時(shí)間后方可使用。
濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.結(jié)果分析:
根據(jù)說(shuō)明書的指導(dǎo)閱讀酶標(biāo)板上的吸光度值,并計(jì)算出樣本中的水通道蛋白含量。