分享一下熒光PCR檢測試劑盒具體的操作流程

　　熒光PCR檢測試劑盒采用熒光PCR技術(shù)，通過熒光信號的變化檢測犬線粒體基因的特異性序列。該試劑盒適用于鑒定多種樣本中是否含有犬源性基因成份。作用原理：所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

　　熒光PCR檢測試劑盒具體的操作流程：

　　1.整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本手冊的要求在試劑制備區(qū)、樣品處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行。各區(qū)域的實驗服、儀器和耗材應(yīng)單獨使用，不得混用；實驗中采用了帶濾芯的吸頭；樣品處理區(qū)應(yīng)配備生物安全柜，在其中進行樣品處理；三個區(qū)域應(yīng)配備紫外線消毒裝置。

　　2.為避免RNA降解，樣品處理過程應(yīng)在0-4℃下進行，實驗完成后應(yīng)立即進行計算機檢測；樣品處理中使用的儀器和耗材應(yīng)在不含核酶的情況下進行處理。

　　3.應(yīng)為每個實驗設(shè)置陰性和陽性對照。

　　4.試劑盒中的所有試劑在使用前應(yīng)在室溫下充分熔化和混合，并應(yīng)立即離心。

　　5.試劑盒中的所有陰性和陽性對照品應(yīng)轉(zhuǎn)移到樣品制備區(qū)，并在使用前單獨儲存。

　　6.為了防止熒光干擾，必須避免徒手直接接觸PCR反應(yīng)管，并避免PCR反應(yīng)管上的任何標記。

　　7.儀表放大的相關(guān)參數(shù)應(yīng)根據(jù)本手冊的相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號的試劑不能混合。

　　8.在實驗過程中，產(chǎn)品廢棄物應(yīng)在丟棄前進行無害化處理。

　　熒光PCR檢測試劑盒檢測方法的局限性有什么？

　　1、樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

　　2、樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

　　3、陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

　　4、病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

　　5、不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

　　6、試劑運輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；

　　7、本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。