熒光PCR檢測(cè)試劑盒采用的是實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),這種技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
熒光PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品性能:
1.操作簡(jiǎn)單:只需一次加樣,可完成cDNA合成和定量PCR實(shí)驗(yàn),同時(shí)還可避免樣本交叉污染。
2.靈敏度高:緩沖體系中添加了提高擴(kuò)增能力的促進(jìn)因子,可檢測(cè)低至10pg的總RNA。
3.特異性強(qiáng):預(yù)混液中添加了有效抑制非特異性擴(kuò)增的組分,可抑制引物二聚體的產(chǎn)生,定量更為精確。
4.優(yōu)秀的擴(kuò)增性能:良好的線性關(guān)系,擴(kuò)增效率可高達(dá)99%,且重復(fù)性高。
5.適用于所有機(jī)型:試劑盒中有獨(dú)立包裝的的ROXI和ROXII、可用于校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差。
PCR快速檢測(cè)試劑盒具體操作步驟如下:
1.從試劑盒中分別取出熒光反應(yīng)液、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照。
2.在室溫下*溶解后,充分震蕩混勻,瞬時(shí)離心。
3.取出PCR八連管,放在PCR板上。
4.在PCR八連管內(nèi)分裝20μl熒光反應(yīng)液,分別向6個(gè)PCR管中加入5μL提取好的樣品核酸,其余兩個(gè)管內(nèi)分別加入5μl陰性對(duì)照和5μl陽(yáng)性對(duì)照。完成后蓋上管蓋,并在右上角做好標(biāo)記。
5.將標(biāo)記好的PCR八連管放入儀器震蕩混勻后瞬時(shí)離心,取出后拿起觀察有無(wú)氣泡。
6.打開(kāi)熒光定量PCR儀器,將PCR八連管放入卡槽中,蓋上儀器。
7.點(diǎn)擊實(shí)驗(yàn)程序,選擇新建實(shí)驗(yàn),點(diǎn)擊運(yùn)行程序,并按照PCR八連管標(biāo)記順序依次選擇孔位信息:待測(cè)樣本、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照。
8.點(diǎn)擊開(kāi)始按鈕,運(yùn)行實(shí)驗(yàn)。
9.實(shí)驗(yàn)完成后,在屏幕查看實(shí)驗(yàn)結(jié)果,點(diǎn)擊詳細(xì)數(shù)據(jù)可查看實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),進(jìn)行數(shù)據(jù)回顧。