本篇給大家?guī)?lái)熒光PCR檢測(cè)試劑盒的具體操作步驟

　　熒光PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品特性和原理分別是什么呢？

　　高靈敏度：它可以量化低拷貝或多樣性模板。

　　特異性強(qiáng)：利用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制抑制非特異性擴(kuò)增。

　　重復(fù)性好：放大曲線符合度高，受干擾影響小。

　　放大效率高：放大曲線CT值低，峰值啟動(dòng)快，效率高。

　　原理：所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)的積累實(shí)時(shí)監(jiān)控整個(gè)PCR過(guò)程，然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

　　熒光PCR檢測(cè)試劑盒操作流程：

　　1、整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本手冊(cè)的要求在試劑制備區(qū)、樣品處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作。各區(qū)域的實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)單獨(dú)使用，不得混用；實(shí)驗(yàn)采用帶濾芯的吸入頭；樣品處理區(qū)應(yīng)配備生物安全柜，樣品處理應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行；三個(gè)區(qū)域應(yīng)配備紫外線滅菌裝置。

　　2、為了避免RNA降解，樣品處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃下操作，并在實(shí)驗(yàn)后立即進(jìn)行測(cè)試；樣品處理中使用的儀器和耗材應(yīng)不含核酶。

　　3、每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

　　4、試劑盒中的所有試劑在使用前應(yīng)在室溫下充分熔化和混合，并應(yīng)立即離心。

　　5、試劑盒中的所有陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品應(yīng)轉(zhuǎn)移到標(biāo)本制備區(qū)，并在一次使用前單獨(dú)存放。

　　6、為防止熒光干擾，避免徒手直接接觸PCR反應(yīng)管，避免PCR反應(yīng)管上有任何標(biāo)記。