柱式血液DNAout使用說(shuō)明

1.在 0.02-1 mL 新鮮或抗凝血液（冷凍血需先 37℃水浴融化）中加入 0.5 mL紅細(xì)胞裂解液（A 型），吹打混勻。

注意：溶液 A 非常容易長(zhǎng)菌，取用需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。 

    a) 哺乳動(dòng)物，血液使用量以 300 uL 以下為宜，使用量越大產(chǎn)量越高，但產(chǎn)率會(huì)降低。如果血液多于 300 uL，重復(fù) 1-2 步兩次可以提高產(chǎn)率。

    b) 禽類(lèi)動(dòng)物，血液使用量以 20 uL 以下為宜，可以從第 3 步做起。 

2. 室溫 12,000-15,000 rpm 離心 5 分鐘，沉淀呈粉紅色，小心傾去上清。 

3. 再短暫離心半分鐘，吸棄殘留的液體。此步有利于后面的細(xì)胞裂解，但一般可以省略。

4. 向有沉淀的離心管內(nèi)加入 0.5 mL 溶液 A（溶液 A 有少量晶體沉淀，用前需要搖晃均勻），用移液槍吹打使沉淀充分懸浮起來(lái)。此步目的是裂解細(xì)胞，釋放 DNA，所以吹打越充分越好。

5. 靜置 2 分鐘待溶液變清亮后，將液體轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中并靜置 2-5 分鐘，以使 DNA 與膜充分結(jié)合。 

6. 12,000 rpm 離心半分鐘，DNA 將吸附到膜上，棄收集管中的廢液。 

7. 加入 0.7 mL 的通用洗柱液，12,000 rpm 離心半分鐘，棄收集管中的廢液。 

8. 加入 0.3 mL 的通用洗柱液，12,000 rpm 離心半分鐘，棄收集管中的廢液。

9. 12,000 rpm 離心半分鐘，甩干殘留液體。此步很重要，以去除膜上殘留通用洗柱液，否則會(huì)影響后續(xù)反應(yīng)。

10.將離心吸附柱置于一新的 1.5 mL 塑料離心管（自備）中，加入適量 30-100uLDNA 洗脫液 2.0，室溫放置 2 分鐘。如果將 DNA 洗脫液 2.0 在 65℃預(yù)熱后再使用，洗脫 DNA 的效果會(huì)更好。 

11. 12,000 rpm 離心半分鐘，離心管底溶液即 DNA 溶液?？梢粤⒓词褂没蚍疟溟L(zhǎng)期保存。