酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒樣本處理方法

A、血液樣本

    有些生理因素，如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應在標本上注明該因素。

1．外周血

    一般選取左手無名指內側采血，該部位應無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對燒傷病人，可選擇皮膚完整處采血。由于部分血液常規(guī)檢測(如白細胞計數(shù)、分類等)受生理因素影響波動過大，比較時宜使條件盡量一致。涉及到體內出、凝血功能的檢測項目(如血小板計數(shù)，出血時間或凝血時間等)的檢測，一定要注意了解患者是否用過抗凝、促凝藥物，以便在減少或避免干擾因素的影響。

2．靜脈血

    除涉及各種止血和血栓檢測等項目需采用抗凝靜脈血血漿外，目前絕大多數(shù)檢測項目的分析檢測可直接采用靜脈血的血清。在血清檢測項目中，有些(如血糖，血脂等)受飲食及晝夜因素影響較大，一般以清晨空腹血標本為宜；有些在血中衰變較快(血清酶活性測定如ACP活性等)，0~4℃貯存活性減弱也不一，這些項目的檢測必須及時而快速；有些(如肌酸激酶等)受運動等因素影響較大。抽血時避免溶血的發(fā)生也十分重要，尤其涉及血鉀，LDH等的測定。

B、尿液樣本

同血標本一樣，尿液標本受飲食、運動、藥物量等因素的影響也較大，特別是飲食的影響，故一般來說晨尿優(yōu)于隨機尿。晨尿是指清晨起床后的第一次尿標本，較濃縮和酸化，有形成分(如血細胞，上皮細胞，管形)相對集中便于觀察。隨機尿即隨意一次尿，留取方便，但受飲食、運動、藥物影響較甚，易于出現(xiàn)假陽性和假陰性結果，如飲食性蛋白尿，飲食性糖尿，維生-素C干擾潛血結果等。餐后尿(午餐后2小時收集的患者尿液)適用于尿糖，尿蛋白和尿膽原的檢查，此時的尿標本可增加試驗敏感性，檢出較輕微的病變。12小時尿細胞計數(shù)即Addis計數(shù)(前晚8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液)，因時間較長，細菌易繁殖，須加入防腐劑甲醛。24小時尿(第一天晨8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液)中化學物質的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羥類固醇，兒茶酚胺，Ca2+等，檢測不同的物質，選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細菌培養(yǎng)，要求無菌，沖洗外陰后留取標本。所有尿標本的收集都應足量，最少12 ml，最好50 ml，定時尿須全部收集，對女性患者應避免陰道分泌物、經(jīng)血污染尿標本。

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

C、糞便樣本

    糞便標本的檢測對判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價值。采集時要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便，對外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材。找寄生蟲蟲體及作蟲卵計數(shù)應收集24小時糞便。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應于排便后立即檢查，從有膿血和稀軟處取材，保溫送檢。查日本血吸蟲蟲卵時應取粘液、膿血部分，孵化毛蚴時至少留取30g糞便，且需盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12時或清晨排便前自肛-門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。隱血試驗(化學法)，試驗前3日禁食肉類及含動物血食物并禁服鐵劑，維生-素C等。所有糞便標本采集后1小時內應檢查完畢，以防止有形成分受消化酶及pH的破壞,來不及檢測的，應及時用PBS進行緩沖處理，離心去上清保存。

盡量采集干的糞便，糞便過稀會較難處理且降低檢測的準確性。采集的重量應大于 50 mg，將糞便用 PBS 洗 3 次（最終糞便質量：PBS 體積=1:9），用超聲粉碎（或搗碎）后于 5000×g 離心 10 分鐘，取上清檢測。

D、腦脊液樣本

腦脊液標本采集后立即送檢，放置過久將影響檢驗結果：如細胞變性，破壞，導致計數(shù)和分類不準；有些化學物質如葡萄糖等將分解含量減少；細菌發(fā)生自溶影響細菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個無菌管，第一管作細菌培養(yǎng)，第二管作化學分析和免疫學檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查，三管的順序不宜顛倒。因標本采集較難，全部送檢和檢測過程應注意安全。

E、胸腹水樣本

與腦脊液標本一樣，采集后的標本注意安全，及時送檢。一般也分裝三管，一管作常規(guī)細胞學檢查，一管生化檢查，一管細菌培養(yǎng)，順序以與腦脊液相同為宜。

F、前列腺液樣本

    前列腺液標本由前列腺按摩后采集，液量少時直接滴在載玻片上及時送檢，須注意防止標本蒸干，量多時收集在潔凈干燥的試管中。若按摩不出前列腺液，可檢查按摩后的尿液沉渣。

G、精液樣本

精液標本采集前應禁欲3~7天，排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中，保溫并及時送檢。由于精-子生成日間變動較大，一般應檢查2~3次(每次間隔1~2周)方可做診斷。

將精液收集于無菌容器中，正常精液射出體外呈稠厚的膠凍狀，射出體外后需在室溫或 37 度水浴箱中使其在前列腺分泌的纖維蛋白溶解酶的作用下液化，變的稀薄。待精液*液化后，將精液 4000 rpm 離心 10 分鐘分離精漿進行檢測。

H、陰道分泌物樣本

    陰道標本采集前24小時應禁止房事、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等，取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材，制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標本，經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標本。

(二) ELISA的樣本實驗準備

在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行

檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的，最好-70℃凍存?zhèn)溆?。標本應避免反復凍融?/p>

    液體類標本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

2. 血漿：

應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

3. 尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。

5. 培養(yǎng)細胞

    檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

6. 組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢

測，其余冷凍備用。

7. 牛奶

方法1

取牛奶10ml入離心管，加入10ml乙酸乙酯，超聲震蕩30min。

然后4000g離心10min（如兩相之間出現(xiàn)乳化層，則將樣品瓶放在80℃的水浴中約5min，再離心）移取1ml乙酸乙酯層至另外試管中，60℃氮氣流下蒸干，殘留物用緩沖液2ml緩沖后備用，前處理過程約需2小時。

方法2

取10ml牛奶10℃3500G離心10MIN，祛除上層脂肪，取5ml脫脂奶粉加入150微升17.2%亞鐵氰-化鉀，出現(xiàn)沉淀，漩渦混合，然后加入150微升53.5%硫酸鋅。再次漩渦混合。15攝氏度3500g離心10分鐘，取上層清液用緩沖液1：2稀釋待用，前處理過程所需1小時。

處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復凍融，樣本處理之后可分裝密封保存，4 度保存應小于 1 周，-20 度不應超過 1 個月，-80 度不應超過 2 個月。在標本使用前應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解。樣本的處理是實驗成功的第一步